一. 原理
凯氏法测定样品中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。
二. 试剂
- 硫酸:化学纯,含量为98%,无氮。
- 混合催化剂:1g硫酸铜,9g硫酸钾,均为化学纯,磨碎混匀。
- 氢氧化钠:化学纯,40%水溶液(m/v)。5%水溶液(m/v)
- 硼酸:化学纯,2%水溶液(m/v)。
- 混合指示剂:甲基红0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为三个月。
- 盐酸标准溶液:c(HC1)=0.1mol/L。8.3ml盐酸(分析纯),注入1000ml蒸馏水中。
- 硼酸吸收液:2%硼酸溶液(20 g/L):称取100 g 硼酸,加水溶解后并稀释至5000 mL。加入(1:3.5混合指示剂6ML)摇匀,再加入5%的氢氧化钠稀释溶液0.35ML摇匀,颜色呈紫红色。
三. 仪器设备
- 实验室用样品粉碎剂或研钵
- 分样筛:40目(孔径0.45mm)
- 分析天平:感量0.0001g
- 消化炉(SKD-08S2)
- 容量瓶100ml
- 滴定管:10、25ml
- 消化管:300ml
- 定氮仪(SKD-2000)
四. 样品的选取和制备
样品粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止样品成分的变化。
五. 分析步骤
- 样品的消化
称取样品0.5~1g(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入消化管中,加入5g混合催化剂,与样品混合均匀,再加入10ml硫酸,将消化管置于消化炉上加热,直至呈透明的蓝绿色,然后在继续加热,至少30分钟。
- SKD-08S2消化炉
- 6个样品和2个空白)
- ”SET”键+“A/M”键3秒,跳出第二设置区程序参数修改界面。连续按“SET”键数次出来
- “RUN”=“3”,pro= “ 1 ” ,再设置r1 =200,T1=5分钟,c1=180度,r2=180,T2=5,C2=250度,r3=180, T3=5, C3=350度,r4=200,T4=60,c4=410,r5=0,T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,设置好后等几秒钟,程序会自动保存。
- -----------程序自动运行,自动结束。如果出现不运行,再检查“RUN”设置为“3”,pro= “ 1 ” 。
程序段 | R:斜率(min/℃) | T:保温时间 | C:目标温度 |
1 | 200 | 5 | 180 |
2 | 180 | 5 | 250 |
3 | 180 | 5 | 350 |
4 | 200 | 60 | 410 |
- SKD-2000全自动定氮仪
-
- 45ml,稀释液40ml,标准酸0.0953(mo/l),蒸馏功率100%,蒸馏时间6分钟,硼酸仪器自动加。
-
编号 | 样品重量g | 空白(ul) | 标准酸浓度mo/l | 样品消耗量ml | 蛋白含量% |
1 | 0.9627 | 65 | 0.0953 | 14.883 | 12.8437 |
2 | 0.8475 | 65 | 0.0953 | 13.102 | 12.8362 |
3 | 0.8428 | 65 | 0.0953 | 12.970 | 12.7768 |
4 | 0.9478 | 65 | 0.0953 | 14.635 | 12.8275 |
5 | 0.9904 | 65 | 0.0953 | 15.322 | 12.8543 |
6 | 0.9252 | 65 | 0.0953 | 14.267 | 12.8087 |
平均值:12.8245
RSD(相对标准偏差值): 0.002%