豆粕中的粗蛋白含量检测方案
一.原理
凯氏法测定样品中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。
二.试剂
- 硫酸:分析纯,含量为98%,无氮。
- 催化剂:(硫酸铜:硫酸钾为1:10的混合物)
- 40%的氢氧化钠
- 2%的硼酸+甲基红和溴甲酚绿混合的显色剂
- 盐酸标准溶液:c(HCL)=0.1mol/L。8.3ml盐酸(分析纯),注入1000ml蒸馏水中。
- 硼酸吸收液:2%硼酸溶液(20 g/L):称取100 g硼酸,加水溶解后并稀释至5000 mL。加入(1:3.5混合指示剂6ML)摇匀,再加入5%的氢氧化钠稀释溶液0.35ML摇匀,颜色呈紫红色。
- 蒸馏水
三.仪器设备
- 样品:豆粕粉末
- 万分之一天平
- 红外石英消化炉SKD-08S2
- 容量瓶100ml
- 滴定管:10、25ml
- 消化管:300ml
- 全自动凯氏定氮仪SKD-1000
- 自动定氮仪SKD-800
四.分析步骤
- 样品的消化
称取样品0.2g和0.6g各3各(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入消化管中,加入5g混合催化剂,与样品混合均匀,再加入10ml硫酸,将消化管置于消化炉上加热,直至呈透明的蓝绿色,然后在继续加热,至少30分钟。
- SKD-08S2消化炉
- 6个样品和2个空白)
- ”SET”键+“A/M”键3秒,跳出第二设置区程序参数修改界面。连续按“SET”键数次出来
- “RUN”=“3”,pro= “ 1 ” ,再设置r1 =200,T1=5分钟,c1=180度,r2=180,T2=5,C2=250度,r3=180, T3=5, C3=350度,r4=200,T4=60,c4=400,r5=0,T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,设置好后等几秒钟,程序会自动保存。
- -----------程序自动运行,自动结束。如果出现不运行,再检查“RUN”设置为“3”,pro= “ 1 ” 。
程序段 | R:斜率(min/℃) | T:保温时间 | C:目标温度 |
1 | 200 | 5 | 180 |
2 | 180 | 5 | 250 |
3 | 180 | 5 | 350 |
4 | 200 | 60 | 400 |
- 样品消化好后,冷却至室温。
- 全自动定氮仪
- 45ml,稀释液40ml,标准酸HCL 0.1040(moL/L),蒸馏功率100%,蒸馏时间6分钟,硼酸SKD-1000全自动定氮仪自动加。
- 自动凯氏定氮仪
- 45ml,稀释液40ml,标准酸HCL 0.1040(moL/L),蒸馏功率100%,蒸馏时间6分钟,加硼酸50ml
-
| 编号 | 样品重量g | 空白(ul) | 标准酸浓度mo/l | 样品消耗标准酸量ml | N含量% |
SKD-800/1000 自动凯氏定氮仪 | 1 | 0.2797 | 100 | 0.1040 | 14.35 | 7.4232 |
2 | 0.3194 | 100 | 0.1040 | 16.22 | 7.3536 |
3 | 0.3124 | 100 | 0.1040 | 15.90 | 7.3691 |
4 | 0.6095 | 101 | 0.1040 | 31.242 | 7.4686 |
5 | 0.6012 | 101 | 0.1040 | 30.274 | 7.3391 |