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动物饲料蛋白检测
发布时间:2013-05-15   点击次数:1481次

 GB/T 6432—94

  本标准参照采用ISO 5983—1979 《动物饲料──氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。

1 主题内容与适用范围

  本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。

  本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

2 引用标准

  GB 601 化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备

3 原理

  凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。

4 试剂

4.1 硫酸(GB 625):化学纯,含量为98%,无氮。

4.2 混合催化剂:0.4g硫酸铜,5个结晶水(GB 665),6g硫酸钾(HG 3─920)或硫酸钠(HG 3─908),均为化学纯,磨碎混匀。

4.3 氢氧化钠(GB 629):化学纯,40%水溶液(mV)。

4.4 硼酸(GB 628):化学纯,2%水溶液(mV)。

4.5 混合指示剂:甲基红(HG 3─958)0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿(HG 3─1220)0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为三个月。

4.6 盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB 601制备。

4.6.1 盐酸标准溶液:c(HCl)=0.1mol/L。8.3mL盐酸(GB 622,分析纯),注入 1000mL蒸馏水中。

4.6.2 盐酸标准溶液:c(HCl)=0.02mol/L。1.67mL盐酸(GB 622,分析纯),注入1000mL蒸馏水中。

4.7 蔗糖(HG 3─1001):分析纯。

4.8 硫酸铵(GB 1396):分析纯,干燥。

4.9 硼酸吸收液:1%硼酸水溶液1000mL,加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL,0.1%甲基红乙醇溶液7mL,
4%氢氧化钠水溶液0.5mL,混合,置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。

5 仪器设备

5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。

5.2 分样筛:孔径0.45mm(40目)。

5.3 分析天平:感量0.0001g。

5.4 消煮炉或电炉。

5.5 滴定管:酸式,10、25mL。

5.6 凯氏烧瓶:250mL。

5.7 凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。

5.8 锥形瓶:150、250mL。

5.9 容量瓶:100mL。

5.10 消煮管:250mL。

5.11 定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动,全自动蛋白质测定仪。

6 试样的选取和制备

  选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试样成分的变化。

7 分析步骤

7.1 仲裁法

7.1.1 试样的消煮

  称取试样0.5~1g(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入凯氏烧瓶(5.6)中,加入6.4g混合催化剂(4.2),与试样混合均匀,再加入12mL硫酸(4.1)和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶(5.6)置于电炉(5.4)上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力(360~410℃)直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2h。

7.1.2 氨的蒸馏(蒸馏步骤的检验见附录A)

7.1.2.1 常量蒸馏法

  将试样消煮液(7.1.1)冷却,加入60~100mL蒸馏水,摇匀,冷却。将蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸(4.4)吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶(5.6)中加入50mL氢氧化钠溶液(4.3),轻轻摇动凯氏 烧瓶(5.6),使溶液混匀后再加热蒸馏,直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶,使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏1~2min,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均需流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。

7.1.2.2 半微量蒸馏法

  将试样消煮液(7.1.1)冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液。将半微量蒸馏装置(5.7) 的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸(4.4)吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶(5.8)内。蒸汽发生器 (5.7)的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10~20mL注入蒸馏装置(5.7)的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液(4.3),小心提起 玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶(5.8)使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。

  注:7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近,可任选一种。

7.1.2.3 蒸馏步骤的检验

  称取0.2g硫酸铵(4.8),代替试样,按7.1.2或7.2.2步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 

7.1.3 滴定

  用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L( 4. 6. 1)或0 .02mol/L(4.6.2)盐酸标

  准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

7.2 推荐法

7.2.1 试样的消煮

  称取0.5~1g试样(含氮量5~80mg)准确至0.0002g,放入消化管中,加2片消化片(仪器自备)或
6.4g混合催化剂(4.2),12mL硫酸(4.1),于420℃下在消煮炉上 消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。

7.2.2 氨的蒸馏

  采用全自动定氮仪(5.11)时,按仪器本身常量程序进行测定。

  采用半自动定氮仪(5.11)时,将带消化液的管子插在蒸馏装置上,以25mL硼酸(4.4)为吸收液,加入2滴混合指示剂(4.5),蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内,然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液(4.3)进行蒸馏。蒸 馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均需流入锥形瓶内。

7.2.3 滴定

  用0.1mol/L的标准盐酸溶液(4.6.1)滴定吸收液,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

8 空白测定

  称取蔗糖0.5g,代替试样,按第7章进行空白测定,消耗0.1mol/L盐酸标准溶液(4.6.1)的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液(4.6.2)体积不得超过0.3mL。

9 分析结果的表述

9.1 计算见下式:

粗蛋白质(%)=(V2V1)·c×0.0140×6.25/(m×V′/V

式中:V2──

滴定试样时所需标准酸溶液体积,mL;

V1──

滴定空白时所需标准酸溶液体积,mL;

C──

盐酸标准溶液浓度,mol/L;

m──

试样质量,g;

V──

试样分解液总体积,mL;

V′──

试样分解液蒸馏用体积,mL;

0.0140──

与1.00mL盐酸标准溶液〔c(HCl)=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。

6.25──

氮换算成蛋白质的平均系数。

9.2 重复性

  每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。

  当粗蛋白质含量在25%以上时,允许相对偏差为1%。

  当粗蛋白含量在10%~25%之间时,允许相对偏差为2%。

  当粗蛋白质含量在10%以下时,允许相对偏差为3%。

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