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凯氏定氮仪对蛋白质含量的测量步骤
发布时间:2017-10-23   点击次数:627次
   凯氏定氮仪对蛋白质含量的测量步骤
  凯氏定氮仪是对生活中的含有蛋白质的东西进行测量的。粗蛋白是衡量饲料原料、饲料产品zui重要的指标之一。粗蛋白在化验室的检测频率zui高。“粗蛋白”的测定是用凯氏定氮仪测定的,即在崔化剂的作用下,用硫酸在高温下使样品中的有机物分解、脱水,使蛋白质和氨化物转变成无机态氨和浓硫酸生成硫酸铁;硫酸铁在强碱作用下,经蒸馏放出氨气,经冷凝的液态氨被硼酸吸收生成四硼酸按,用标准酸滴定以确定样品中的含氮量,所测含氮量乘以6.25,即为样品中粗蛋白的含量。反应过程分为消化、蒸馏、滴定三步。蛋白质测定仪即是根据以上原理设计而成的。
  凯氏定氮仪是测定食品中蛋白质含量的经典方法,测定结果稳定,准确。其中凯氏定氮仪、蛋白质测定仪都是利用凯氏定氮法设计的,但是全自动蛋白质测定仪价格昂贵,目前尚难普及。而相应的凯氏定氮仪却得到了相关人士的认可。因为相较于全自动蛋白质测定仪,凯氏定氮仪的性价比更高,而且其测定结果与标准法测定无显著差异。
  凯氏定氮仪作为蛋白质含量测定的首推仪器,具有不可撼动的地位。用凯氏定氮仪测定蛋白质含量,其步骤如下:
  1.样品消解:准确称取0·5~2·0 g混匀固体样品或吸取5·0~10·0 ml液体样品于干净的消化管内,加0·5 ~1·0 g硒粉或10 g硫酸钾+1 g硫酸铜, 10ml硫酸,摇匀,加10 ml过氧化氢,混匀,将消化管放入消化器,放上装好密封圈的排污管,打开抽气三通进水,使抽气三通处于吸汽状态。接通电源,进行消化,如遇难消化的奶粉等样品,可于消化过程中适当增加过氧化氢的加入量,至消化液呈透明蓝绿色液体,关闭电源,冷却,定容至100 ml。此过程约需1~2 h。
  2.测定:打开电源,按仪器说明书调试凯氏定氮仪进入待机状态(约0·5 min)。把装有50 ml硼酸溶液及2~3滴指示液的三角瓶放到接收托盘上,接收管插入液面,再将内装适量消化样品的消化管放到蒸馏器上,加20 ml纯水及消化时硫酸5倍量的氢氧化钠液,打开蒸汽开关进行蒸馏。当流出液至150 ml左右时下移接收瓶,使接收管脱离液面,用纯水冲洗接收管,继续蒸馏0·5 min,结束。取下消化管,关掉蒸汽开关,凯氏定氮仪还原到待机状态。馏出液用0·0500 mol/L的盐酸标准溶液滴定至淡紫色为终点,计算蛋白质含量。同时做试剂空白实验。
  与粗蛋白测定仪相比,凯氏定氮仪只是较后者少了消化炉,而其测定结果能够满足实验室的需求。因此,凯氏定氮仪在很多地方都得到了认可。

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