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乳与乳制品中非蛋白氮含量测定方法的改进
发布时间:2010-12-07   点击次数:1256次

 
乳与乳制品中非蛋白氮含量测定方法的改进

(徐州市畜禽水产品质量检测中心等)
原文出处来源于仪器信息网

摘要:摘要:对乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定方法进行了调整改进,使用了全自动定氮仪,将蛋白沉淀后滤纸过滤改为离心取上清液,去掉了消解液转移定容再取用的实验步骤,将盐酸标准滴定溶液浓调整为0.02 mol/L,每个样品减少25ml三氯乙酸溶液的用量,15ml浓硫酸的用量。改进后各浓度添加回收试验的相对标准偏差均低于3%,回收率在99.89%-102.32%。

关键词:非蛋白氮;改进

1 引言

乳与乳制品中的非蛋白氮(MPN),是指乳与乳制品中非蛋白状态的含氮元素的化合物。在动物饲养业中,非蛋白氮作为反刍动物饲料的蛋白代替物,用做补充反刍动物对日粮蛋白的需要[1]。牛乳中大约含0.5%的含氮化合物,蛋白质占含氮化合物的95%,非蛋白氮占含氮化合物的5%[2]。正常情况下,乳品中非蛋白氮含量与蛋白质代谢物尿素氮含量呈正相关[3]。然而,不法商贩受经济利益的驱使,直接向原料乳中添加三聚氰胺等严令禁止添加的含氮化合物,给社会造成了重大危害。乳与乳制品中的非蛋白氮的测定方法(GB/T 21704-2008)是三聚氰胺事件后出台的国家标准,运用了半微量凯氏定氮法,操作较为繁琐,本文对检测方法进行了适当的调整改进,使用了全自动定氮仪,取得了良好的试验效果。

2 实验部分

2.1 试剂


盐酸为优级纯(国药集团化学试剂有限公司);其他试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。

2.2 样品处理

将待测样品摇匀,准确称取5 g,到0.0001 g,置于离心管中,加入15 ml 15%三氯乙酸溶液,漩涡3 min混匀,8000 r/min离心5 min,取10 g上清液置于消解管中,再加入0.1 g CuSO45H2O2 g K2SO45 ml浓硫酸。置于消解仪中,260℃消解至泡沫停止,420℃消解1 h。取下放冷,加入10 ml去离子水,进行定氮蒸馏。

空白试验:取0.1 g蔗糖于离心管中,按上法进行处理,并进行定氮蒸馏。

2.3 定氮蒸馏

甲基红—溴甲酚绿乙醇溶液指示剂(甲基红1 g/L—溴甲酚绿5 g/L10 ml20 g硼酸定容至1L用0.05mol/L氢氧化钠溶液调整pH至4.2左右,配置成指示剂-硼酸吸收液。

将消解管置于定氮仪中,设置定氮仪加入20 ml 400g/L NaOH溶液,进行蒸馏,用0.02% 盐酸标准滴定溶液进行滴定。

3 结果与讨论

3.1 精密度试验、空白试验和添加回收试验


表1精密度试验、空白试验和添加回收试验结果







滴定平均体积(ml)

非蛋白氮含量平均值(%)

平均回收率(%)

相对标准偏差(%)

空白(n=6)

0.6553

0.0073

/

2.03

添加浓度

0.02%(n=6)

0.05%(n=6)

0.10%(n=6)

 

1.9145

5.3212

10.3242

 

0.0216

0.0508

0.1023

 

99.89

101.62

102.32

 

2.23

1.56

1.33



吸收液用氢氧化钠溶液调节了pH值,因此空白对照中有较大的滴定体积,这是为了对定氮仪进行精密度测试,并不反应空白中实际的非蛋白氮含量,在滴定样品的时候,需要扣除空白滴定体积。

使用硫酸铵做添加回收试验,在添加浓度0.02%-0.1%范围内,相对标准偏差均低于3%,回收率在99.89%-102.32%。

3.2 离心处理效果试验

表2 离心与滤纸过滤试验结果

样品

离心处理非蛋白氮含量平均值(%)

滤纸过滤处理非蛋白氮含量平均值(%)

生鲜牛乳样品1(n=6)

生鲜牛乳样品2(n=6)

生鲜牛乳样品
(n=6)

0.0216

0.0208

0.0323

0.0214

0.0201

0.0325



GB/T 21704-2008中使用滤纸过滤蛋白质沉淀后的液体,由上表可知,蛋白质沉淀后的液体用离心处理与用滤纸过滤处理的效果相当。

3.3 留样检测结果

对某市畜禽水产品质量检测中心生鲜牛乳留样92份进行了测定,测定结果如下:

 


图1 留样检测结果


66个样品的非蛋白氮含量在0.03%20样品的非蛋白氮含量在0.02%,非蛋白氮含量在0.02%-0.03%的样品占样品总数的93.5%0.01%3.3%0.04%2.2%0.05%1.1%

3.4 处理方法改进

有文献报道,3倍体积的15%三氯乙酸对生鲜牛乳中蛋白质有zui佳的沉淀效果[4]。用离心代替GB/T 21704-2008中滤纸过滤,增加实验的可操作性。减少去除蛋白后的上清液取用量,,按比例减少催化剂硫酸铜和增加沸点的硫酸钾用量。因为乳与乳制品中非蛋白氮含量均较低,因此同时减少了浓硫酸的用量。改进后每个样品减少了25ml三氯乙酸溶液的用量,15ml浓硫酸的用量。取消了消解液定容再取用的步骤,避免了消解液转移定容再转移过程中的损失和不确定度的增加。增加滴定酸溶液的浓度至0.02 mol/L,减小了滴定酸配置过程对滴定结果的影响,在乳与乳制品中非蛋白氮含量为0.03%的情况下,滴定体积约为3 ml。

4 结论

乳与乳制品中非蛋白氮测定的国标方法经改进后,使用了自动定氮仪,调整了样品处理方法,减少了实验操作步骤,增加了实验的可操作性,减少了试剂用量。改进后方法操作更简便,试剂用量更节省,并有良好的精密度和回收率,对乳与乳制品中非蛋白氮的测定有现实指导意义。



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