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关于酶标板性能检验的详细说明
发布时间:2022-01-05   点击次数:181次
   以酶标板作为载体,将浓度为30ug/ml的正常人IgG(抗体)包被在微孔反应板,4℃包被过夜,用BCA法微量蛋白浓度测定试剂盒检测包被前包被液和包被后它孔内液体的蛋白浓度,计算出包被前后液体蛋白含量的差值,即可得出它的吸附能力。
  
  一、酶标板透光率均一性
  随机抽取5块96孔板,用酶标仪设置双波长(主波长450nm,参考波长630nm)检测OD值,根据OD值(OD值=OD450-OD630)计算出各孔的透光率T(吸光度A=-lgTT为透光率)。再计算出CV值(CV=标准偏差/平均值)。
  
  二、仪器:酶标仪、微量移液器(加样枪)、8通道移液器(排枪)(不一定需要)、旋涡混匀器、微型离心机、生化培养箱。
  
  三、材料、试剂
  蒸馏水
  0.05MpH=9.6碳酸盐(CBS)缓冲液
  正常人IgG(sigma,10mg/支)
  BCA微量蛋白质浓度测定试剂盒
  
  四、操作步骤:
  1、复溶正常人IgG(sigma,10mg/支)
  新到的正常人IgG(sigma,10mg/支),离心,使干粉聚到瓶底,瓶内加入1ml蒸馏水,充分溶解、混匀,得到10mg/ml的IgG溶液。
  备注:为保存抗体活性,应置-20℃冻存。为避免反复冻融造成的活性下降,复溶后尽量分装冻存。
  2、配制正常人IgG浓度为50ug/ml的包被液,溶剂为0.05MpH=9.6碳酸盐(CBS)缓冲液。
  3、计算所需包被液的体积V,理论上V=需包被孔数×100ul/孔,但实际上应至少要多配300ul,原因:①后面检测液体蛋白质浓度时要检测包被前包被液蛋白质浓度;②包被时损耗。包被孔数:考虑节约,每块板可以只包被几个孔,如果有几批不同工艺的待检测酶标板,每批抽两块板检测,每块板包被几排孔。
  4、计算需要的10mg/ml的IgG的体积V1=(V×30ug/ml)÷10mg/ml。
  5、计算需要的CBS的体积V2=V-V1
  6、取V2体积的CBS,加入V1体积的10mg/ml的IgG,混匀,制得包被液。
  备注:包被液尽量现配现用,可置2-8℃短期保存。
  7、包被。用移液器每孔加入100ul包被液。加液完成后,用透明胶带封闭板孔,置4℃冰箱包被过夜。
  8、蛋白吸附能力检测:BCA试剂盒。
  9、配制标准曲线溶液
  10、将5mg/mlBSA标准溶液稀释到40ug/ml。
  配制2.5ml40ug/mlBSA:20ul5mg/mlBSA+2480ulCBS,混匀。

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