关于酶标板性能检验的详细说明

　　

　　一、酶标板透光率均一性

　　随机抽取5块96孔板，用酶标仪设置双波长（主波长450nm,参考波长630nm）检测OD值，根据OD值（OD值=OD450-OD630）计算出各孔的透光率T（吸光度A=-lgTT为透光率）。再计算出CV值（CV=标准偏差/平均值）。

　　

　　二、仪器：酶标仪、微量移液器（加样枪）、8通道移液器（排枪）（不一定需要）、旋涡混匀器、微型离心机、生化培养箱。

　　

　　三、材料、试剂

　　蒸馏水

　　0.05MpH=9.6碳酸盐（CBS）缓冲液

　　正常人IgG（sigma，10mg/支）

　　BCA微量蛋白质浓度测定试剂盒

　　

　　四、操作步骤：

　　1、复溶正常人IgG（sigma，10mg/支）

　　新到的正常人IgG（sigma，10mg/支），离心，使干粉聚到瓶底，瓶内加入1ml蒸馏水，充分溶解、混匀，得到10mg/ml的IgG溶液。

　　备注：为保存抗体活性，应置-20℃冻存。为避免反复冻融造成的活性下降，复溶后尽量分装冻存。

　　2、配制正常人IgG浓度为50ug/ml的包被液，溶剂为0.05MpH=9.6碳酸盐（CBS）缓冲液。

　　3、计算所需包被液的体积V，理论上V=需包被孔数×100ul/孔，但实际上应至少要多配300ul，原因：①后面检测液体蛋白质浓度时要检测包被前包被液蛋白质浓度；②包被时损耗。包被孔数：考虑节约，每块板可以只包被几个孔，如果有几批不同工艺的待检测酶标板，每批抽两块板检测，每块板包被几排孔。

　　4、计算需要的10mg/ml的IgG的体积V1=(V×30ug/ml)÷10mg/ml。

　　5、计算需要的CBS的体积V2=V-V1

　　6、取V2体积的CBS，加入V1体积的10mg/ml的IgG，混匀，制得包被液。

　　备注：包被液尽量现配现用，可置2-8℃短期保存。

　　7、包被。用移液器每孔加入100ul包被液。加液完成后，用透明胶带封闭板孔，置4℃冰箱包被过夜。

　　8、蛋白吸附能力检测：BCA试剂盒。

　　9、配制标准曲线溶液

　　10、将5mg/mlBSA标准溶液稀释到40ug/ml。

　　配制2.5ml40ug/mlBSA：20ul5mg/mlBSA+2480ulCBS,混匀。