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沛欧定氮仪怎样测定花生粕和豆粕中的粗蛋白含量?

更新时间:2017-12-12  |  点击率:1763

花生粕是从经压榨提炼油料后的产品,而花生粕的营养价值较高, 其代谢能是粕类饲料中zui高的, 粗蛋白质含量接近大豆粕,高达达48%以上。

可使用沛欧凯氏定氮仪SKD-100及红外石英消化炉SKD-08S2来测定其粗蛋白含量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。)

当蛋白质与浓硫酸共热时,其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并进一步与硫酸作用天生硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是,这个反应进行得比较缓慢,通常需要加进硫酸钾或硫酸钠以进步反应液的沸点,并加进硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。消化完成后,在凯氏定氮仪中加进浓碱,可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借助水蒸汽蒸馏法,将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中氢离子结合,使溶液中的氢离子浓度降低,指示剂颜色改变,然后用标准无机盐酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%,即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质,用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。 

1 实验材料 

1.1 器材    

SKD-100凯氏定氮仪 、SKD-08S2红外石英消化炉(消化炉可以任意选择消化孔数,而不影响热量散失)1.2 试剂
实验材料
器材
300ml凯氏烧瓶 4个; 
移液管;锥形瓶; 
试管; 
小玻璃珠 
试剂 
98%浓硫酸分析纯; 
35%氢氧化钠溶液;
2%硼酸溶液; 
标准盐酸溶液(0.01mol/L)。 
粉末硫酸钾-硫酸铜混合物 :K2SO4CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。 
混合指示剂(田氏指示剂):由50ml 0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1%甲基红乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。 
样品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。 
2.实验步骤
安装凯氏定氮仪。 

  

消化:取4个300ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠,在1号及2号瓶中各加样品1ml,催化剂(K2SO4CuSO4·5H2O)200 mg,浓硫酸5 ml。留意加样品时应直接送进瓶底,而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1 ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸,作为对照。在透风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力,不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力,冷却至室温。 (上海沛欧SKD-08S2消化炉可编程设定消化炉消化样品的升温曲线)

蒸馏: 蒸馏器的洗涤:用水洗涤干净微量凯氏定氮仪,在蒸汽发生器中加进用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂,用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后,在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶,继续蒸汽洗涤2分钟,观察锥形瓶内的溶液是否变色,如不变色则证实蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶,停止加热,打开夹子。 (沛欧skd-100可以设定清洗程序)
蒸馏:设定取30%的氢氧化钠溶液10ml,向玻璃杯中加进蒸馏水约5ml稀释液,设定蒸馏时间5分钟,开始蒸馏。氨气进进锥形瓶,瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。再继续下一个蒸馏操纵。待样品和对照均蒸馏完毕后,同时进行滴定。 
滴定:用0.01mol/L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量,硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。 
结果计算: 
其中:
A为滴定样品用往的盐酸溶液均匀ml数;
B为滴定对照液用往的盐酸溶液均匀ml数;
C为所取样品溶液的ml数